Promotie mw. L.M. Prély: Activity-based and targeted analyses of matrix metalloproteases

Promotie: mw. L.M. Prély, 11.00 uur, Academiegebouw, Broerstraat 5, Groningen

Proefschrift: Activity-based and targeted analyses of matrix metalloproteases

Promotor(s): prof.dr. R.P.H. Bischoff, prof.dr. A.J.M. van Oosterhout

Faculteit: Wiskunde en Natuurwetenschappen

Meten van actieve matrixmetalloproteïnases

Matrixmetalloproteïnases (MMP's) zijn bij een groot aantal pathologische processen betrokken die gerelateerd zijn aan een verstoring van hun proteolytische activiteit. Daarom is voor de karakterisering van biologische of pathologische voorvallen de meting van actieve MMP's nuttiger dan de bepaling van het totale overschot.

Het doel van het promotieonderzoek van Laurette Prély was de ontwikkeling van analytische technieken ter controle van MMP-activiteit. Daarvoor deed zij onderzoek naar fotogevoelige labeling, absolute kwantificering met massaspectrometrie in de Selected Reaction Monitoring (SRM) modus en naar op activiteit gerichte verrijkingstechnieken.

Het labelen met een S1’ fotogevoelige, op activiteit gerichte probe en het katalytisch domein van recombinant MMP-12, resulteerde in een verhouding van 1:1. Daarnaast kon het gelabelde eiwit geconcentreerd worden met monomere avidine deeltjes, gebaseerd op de biotineketen die deel uitmaakt van de probe. De karakterisering van de aminozuur(en) die vastgehouden worden door covalente binding(en) met de kunstmatige probes wordt nog onderzocht.

Door de toepassing van LC-MS/MS (SRM modus) is er een doelgerichte analyse van MMP-9 in bronchoalveolaire lavage vloeistof (BALF) ontwikkeld. Deze SRM analyse maakt de absolute kwantificering van MMP-9 naar het lage ng/mL niveau mogelijk. De ontwikkelde analyse werd aangepast voor MMP-12 door het meten van een andere set van signatuurpeptiden. Met behulp van deze bepaling wordt de activiteit van MMP-9 nog niet geanalyseerd, Daarom werd de op activiteit gerichte opzuiverbenadering gecombineerd met de MMP-9 en MMP-12 SRM analyse. We hebben deze methodologie verder uitgebreid door de peptiden die behoren tot het pro-domein van MMP-9 alsmede die van de belangrijkste endogene remmer van MMP-9, TIMP-1 te meten. Ten slotte bespreekt Prely de voor- en nadelen van de ontwikkelde technieken en hun potentieel voor automatisering.

Laurette Prély studeerde aan de Université des Sciences et Technologies in Lille, Frankrijk. Haar promotieonderzoek deed zij aan de RUG, bij de onderzoeksgroep Analytical Biochemistry van het Groningen Research Institute of Pharmacy (GRIP), onderzoekschool GUIDE. Het werd gefinancierd door STW. Inmiddels werkt zij als onderzoeker bij het Franse instituut INSERM U943.